Postingan

Menampilkan postingan dari Januari, 2020

tac Promoter: Perpaduan Promoter trp dan Promoter lac

Tentang Tac-Promoter
Tac-Promoter (disingkat Ptac) atau vektor tac, adalah promoter DNA sintetik yang diproduksi dengan mengkombinasikan trp dan lac operon. Sistem ini umum digunakan pada proses produksi protein pada Escherichia coli, Pichia pastoris dan proses lain seperti molecular cloning
Tac-promoter merupakan promoter hybrid, PtacI dan PtacII, yang didapatkan dari  sekuens promoter trp dan promoter lac UV5. Pada hybrid pertama, tac I, posisi upstream -20 dari transcriptional start site didapatkan dari Ptrp. Posisi downstream -20 didapatkan dari Plac UV5. Pada hybrid kedua, Ptac II, posisi upstream -11 pada site Hpa I di dalam pribnow box didapatkan dari Ptrp. Posisi downstream -11 adalah fragmen 46-base-pair yang merupakan hybrid Pribnow box dan seluruh Plac. Tac promoter memiliki tingkat ekspresi gen yang tinggi pada Escherichia coli. Terdapat dua jenis promoter hybrid yang telah dikembangkan, tacI dan tacII. Secara berurutan, tacI dan tacII  memiliki tingkat transkripsi 11 dan 7 kali lebih efisien ketimbang promoter parental Lac UV5.

Sistem

Gambar 1 Konstuksi Plasmid dengan Tac Promoter
(Boer et al, 1983)

Promoter tac menghasilkan ekspresi tingkat tinggi dengan memiliki sistem induksi dan represi yang sama dengan promoter lac. Ptac dapat diinduksi oleh laktosa ataupun IPTG, dan ditekan ekspresinya dengan represor Lacl. Promoter tac, pada regulasinya tidak bergantung dengan cAMP, berbeda dari promoter lac yang pada sistemnya terlibat cAMP untuk membantu pengikatan RNA polimerase pada promoter. 
Regulasi tac promoter ditentukan oleh konsentrasi laktosa atau IPTG, bukan oleh glukosa. Oleh karena, tidak ada pengaruh baik saat glukosa ada atau tidak. Di lain sisi, konsentrasi IPTG yang tinggi akan menonaktifkan protein regulator (repressor) sehingga operator available dan ekspresi menjadi ON. Ketika konsentrasi IPTG rendah, protein regulator (repressor) akan aktif dan berikatan dengan operator sehingga ekspresi menjadi OFF. 

Pustaka
Boer, H. A., Comstock, L. J., & Vasser, M. (1983). The tac promoter: A functional hybrid derived from the trp and lac promoters. Proceedings of the National Academy of Sciences, 80(1), 21-25. doi:10.1073/pnas.80.1.21